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1材料與方法

1．1材料、試劑和儀器設(shè)備自賀州富川臍橙果園購臍橙果實，取新鮮果皮于鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)65℃恒溫烘干至恒重，粉碎后過40目篩備用。甲醇、無水乙醇、硫酸銨均為國產(chǎn)分析純，以上試劑均未經(jīng)過純化處理。橙皮苷標準品（成都艾科達化學(xué)試劑有限公司，純度≥98％）。FW100型高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司），F(xiàn)A1004電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），40目分樣篩（浙江上虞市五四紗篩廠），恒溫水浴鍋B220（上海亞榮生化儀器廠），SHZD（III）型循環(huán)水式真空泵（河南鞏義市予華儀器有限公司），SY300超聲波提取儀（上海寧商超生儀器有限公司，功率300W，頻率40KHz），TU1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），DHG9140A變熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（西斯百瑞儀器有限公司）。

1．2試驗方法

1．2．1標準品溶液的制備準確稱取橙皮苷標準品5．0mg置于10mL燒杯中，加甲醇溶解完全后移入50mL容量瓶中，用甲醇潤洗燒杯3次并移入容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得濃度為0．1mg／mL的橙皮苷標準液。

1．2．2橙皮苷濃度吸光度標準曲線的繪制用移液管準確吸取橙皮苷標準液0．5、1．0、2．0、4．0、6．0、8．0mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，以甲醇作為空白參比，在283nm處測量吸光度。以吸光度為縱坐標，橙皮苷標準液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1．2．3乙醇／硫酸銨雙水相體系的制備將一定濃度的硫酸銨水溶液加入無水乙醇中，通過改變乙醇與水的體積比（硫酸銨用量為0．30g／mL）來形成不同的雙水相體系（乙醇和無機鹽形成雙水相的機理可能是鹽溶液與有機溶劑爭奪水分子形成締合水合物的結(jié)果）。本試驗所選擇的雙水相體系中乙醇初始體積與水初始體積之比為0．43（V／V），硫酸銨用量為0．30g／mL。

1．2．4樣品中橙皮苷的乙醇／硫酸銨雙水相超聲提取及含量測定準確稱取干燥臍橙皮粉2．0g置于100mL錐形瓶中。按一定料液比加入由不同醇水比和硫酸銨濃度配制的乙醇硫酸銨雙水相體系中，在一定溫度下超聲提取一定時間，真空抽濾后濾液于分液漏斗中靜置，分層，取上層乙醇液于50mL容量瓶中用30％乙醇定容，于283nm處測量吸光度，通過標準曲線方程求出乙醇液中橙皮苷濃度，然后計算臍橙皮粉中橙皮苷的得率（提取所得橙皮苷與原料的質(zhì)量百分比）。

1．2．5乙醇／硫酸銨雙水相超聲法提取工藝試驗的設(shè)計單因素試驗。⑴料液比試驗：準確稱取干燥臍橙皮粉末2．0g，按料液比1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸銨濃度0．30g／mL配制的雙水相溶液，在60℃下超聲提取200秒后測定橙皮苷含量。⑵超聲時間試驗：準確稱取干燥臍橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸銨濃度0．30g／mL配制的雙水相溶液，在60℃下分別超聲提取100、150、200、250、300秒后測定橙皮苷含量。⑶超聲溫度試驗：準確稱取干燥臍橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸銨濃度0．30g／mL配制的雙水相溶液，分別在40、50、60、70、80℃溫度下超聲提取250秒后測定橙皮苷含量。⑷醇水比試驗：準確稱取干燥臍橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比分別為0．35、0．4、0．5、0．6、0．7（V／V）、硫酸銨濃度0．30g／mL配制的雙水相溶液，在70℃下超聲提取250秒后測定橙皮苷含量。正交試驗設(shè)計。在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以料液比、超聲處理時間、超聲溫度條件、醇水比等4個因素，各取3個水平，進行L9（34）正交試驗，尋找乙醇／硫酸銨雙水相超聲法提取臍橙皮橙皮苷的最佳工藝條件。然后，準確稱取3份干燥臍橙皮粉末各2．0g，按最佳工藝條件進行提取，計算此法提取橙皮苷的平均得率。

2結(jié)果與分析

2．1標準曲線根據(jù)測定結(jié)果繪制的標準曲線，得到回歸曲線方程：狔＝42．881狓＋0．0478（犚2＝0．9996）。表明，橙皮苷濃度在0．005～0．080mg／mL范圍內(nèi)，其吸光度（283nm）與濃度呈良好線性關(guān)系。

2．2提取工藝

2．2．1單因素試驗料液比對橙皮苷得率的影響：試驗結(jié)果看出，料液比在（1∶20）～（1∶30）時，隨著提取液用量增大，橙皮苷得率逐漸增大，但超過1∶35后得率增大趨于平緩。超聲時間對橙皮苷得率的影響：試驗結(jié)果看出，隨超聲時間的增加，橙皮苷得率呈上升趨勢，在250秒時得率為1．79％，此后，再延長超聲時間得率增大效果不明顯。超聲溫度對橙皮苷得率的影響：隨著提取溫度的升高，橙皮苷的得率逐步增大，溫度在70℃時橙皮苷得率達到最大，為1．70％；溫度超過70℃時橙皮苷得率下降。分析認為，隨著提取溫度的升高，提取液擴散速度增加，使浸提橙皮苷的速度加快，橙皮苷的得率也逐步增大，但溫度超過70℃時，雜質(zhì)溶出量會相應(yīng)增大，增大溶液的黏度，影響橙皮苷物質(zhì)的溶出，反而導(dǎo)致得率下降。醇水比對橙皮苷得率的影響：隨醇水比的增大，橙皮苷能更充分溶出，當(dāng)醇水比為0．5（V／V）時，橙皮苷得率最高，為2．20％；醇水比高于0．5后，橙皮苷溶出量減少。分析認為，橙皮苷中含酚羥基，根據(jù)相似相溶的原理，非極性化合物易溶于非極性溶劑，極性化合物易溶于極性溶劑，因此，較高的醇水比有利于橙皮苷的提取，但醇水比過高時增加了醇溶性物質(zhì)的溶出，使溶液黏度增大，反而會導(dǎo)致橙皮苷的溶解度降低，得率下降。

2．2．2正交試驗試驗結(jié)果看出，影響橙皮苷得率的各因素主次順序為醇水比＞料液比＞溫度條件＞超聲提取時間，乙醇／硫酸銨雙水相超聲法提取臍橙皮橙皮苷的最佳工藝條件為犇3犃3犆3犅2，即醇水比0．6（V／V）、料液比1∶35（m／V）、溫度75℃、超聲時間250秒（見表2）。驗證試驗表明，在最佳工藝條件（犇3犃3犆3犅2）下，乙醇／硫酸銨雙水相超聲法提取臍橙皮橙皮苷的平均得率為4．23％。

3小結(jié)

在單因素試驗的基礎(chǔ)上結(jié)合正交試驗，探討了乙醇／硫酸銨雙水相體系結(jié)合超聲波法提取臍橙皮中橙皮苷的最佳工藝條件。結(jié)果表明，最優(yōu)提取工藝條件如下：按硫酸銨濃度0．30g／mL，醇水比0．6（V／V）配制雙水相，料液比為1∶35（m／V），超聲溫度為75℃，超聲時間為250秒。在最佳工藝條件下，臍橙皮橙皮苷平均得率為4．23％。

作者：陳興田姚昕陳振林周國永鄧志勇單位：賀州學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院